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血清脂蛋白-α

發布時間:2016-12-22 14:37:27   作者:勁牛股份

脂蛋白α在肝臟合成,是由載脂蛋白A和載脂蛋白B通過二硫鍵組成的特殊脂蛋白,成分類似低密度脂蛋白。其主要功能是阻止血管內血塊溶解,促進動脈粥樣硬化形成。脂蛋白α水平持續升高與心絞痛、心肌梗死、腦溢血有密切關系。因為脂蛋白α與高血壓、吸煙、高密度脂蛋白膽固醇低密度脂蛋白膽固醇等諸因素無明顯相關,所以被視為冠心病的獨立危險因子。

血清脂蛋白有三種

(一)高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)

【參考值】

0.94~2.0mmol/L

【臨床意義】

降低具有臨床意義。HDL-C與TG呈負相關系,見于冠心病、動脈粥樣硬化、糖尿病、肝臟損害、腎病綜合征。

(二)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)

【參考值】

沉淀法:2.07~3.12mmol/L,3.15~3.61mmol/L為邊緣升高,≥3.64mmol/L為升高。

【臨床意義】

升高具有臨床意義。LDL-C升高與冠心病發病呈正相關系。

(三)脂蛋白(a),LP(a)

【參考值】 <300mg/L

【臨床意義】

脂蛋白(a)升高已作為冠心病及腦血管疾病發病的獨立危險因素。

英文名

Lipoprotein-α

 檢查

分類

血液生化檢查、脂類測定

原理

用聚苯乙烯微量反應板為固相載體,以apo(a)單克隆抗體(McAb)包被,加入待測標本,使其中的apo(a)與圃相化的McAb結合,洗滌除去未結合的標本中其他蛋白質,再加入酶標記的apo(a)McAb,與結合到固相抗體上的apo(a)作用,洗滌除去未結合的酶標記物。加入酶的相應底物產生顏色反應,顯色程度決定于結合在固相載體上的apo(a)量。

McAb應用雜交瘤技術制備,以超速離心結合層析法純化的Lp(a)為抗原。所制備的McAb應與apoB及纖溶酶原(PMG)無交叉反應。混合數株識別apo(a)上不同抗原位點的McAb,用于建立血清Lp(a)雙抗體夾心ELISA法。

 試劑

(1)包被緩沖液:0.02mol/L碳酸鹽緩沖液,pH9.5。

(2)包被抗體與酶抗體:用McAb混合液,以硫酸銨沉淀法制備抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以過碘酸鹽法交聯辣根過氧化物酶(RZ≥3)得酶標抗體,-20℃保存可穩定數月。

(3)稀釋/封閉液:pH7.4緩沖液含磷酸鹽0.01mol/L及氯化鈉0.15mol/L,臨用前取適量緩沖液,加入適量小牛血清及吐溫-20。

(4)底物溶液:0.1mol/L檸檬酸及0.2mol/LNa2HPO4緩沖液,pH5.0,臨用前每100ml緩沖液中加入鄰苯二胺0.1g及30%H2O20.1ml。

(5)終止液:2mol/LH2SO4。

(6)洗滌液:0.15mol/LNaCl,每升含吐溫-200.5ml。

(7)參考血清:目前尚無公認的定值血清,可暫用商品(如BM公司產品,1410962)。

 操作方法

(1)包被:聚苯乙烯板,96孔。抗apo(a)-IgG用包被液稀釋成10μg/ml濃度,每孔加150μg/ml,4℃過夜。

(2)洗板及封閉:包被后的小孔用洗滌液洗3次,每次5min。每孔中加入封閉液0.15ml,37℃放置30min后,再用洗滌液洗3次。

(3)稀釋:參考血清1∶200稀釋起,用稀釋液倍比稀釋8管,作標準曲線用。血清標本可稀釋成1∶100或1∶2000后復查。

(4)加樣:每孔中加入稀釋后的參考血清及標本各100μl,留空白孔只加稀釋液,37℃1h可用洗滌液洗3次。

(5)加酶標抗體(稀釋度因抗體效價而定,例如1∶20000):每孔100μl,37℃1h。

(6)顯色:每孔中加底物溶液100μl,室溫(25℃)避光放置15min。

(7)終止反應:每孔中加入終止液50μl。

(8)比色:在酶標比色計上以空白孔校零點比色,波長490nm,讀取各孔吸光度(A)。

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